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目录1

生物化学实验室工作规程1

第一篇　生物化学实验技术原理3

第一章　生物化学实验样品的制备3

一、动物样本的制备3

二、植物材料的处理4

三、微生物样品的处理5

第二章　生命大分子物质的制备6

一、材料的选择与处理6

二、细胞的破碎7

三、抽提8

四、目的物初级分离9

五、目的物的纯化与纯度鉴定10

六、制品的浓缩、干燥和保存11

第三章　光谱光度技术14

一、光谱与光度14

二、Lambert-Beer定律及应用15

三、分光光度法在生物化学中的应用16

四、分光光度计的结构16

第四章　层析技术18

一、原理18

二、分类18

四、主要层析技术19

三、分配系数和迁移率19

第五章　电泳技术33

一、电泳的基本原理33

二、影响电泳的主要因素34

三、几种常见的电泳方法36

第六章　离心技术48

一、离心技术原理48

二、离心技术分类50

三、离心机的种类及其特点51

四、离心操作时的注意事项52

实验一 总糖和还原糖测定（3,5－二硝基水杨酸法）53

第七章　糖和脂53

第二篇　生物化学基础实验53

实验二 蒽酮比色定糖法55

实验三 血液葡萄糖含量的测定（Folin-Wu法）56

实验四 血清中游离脂肪酸的测定58

实验五 碘价的测定（Hanus法）60

实验六 酸值的测定63

第八章　蛋白质65

实验七 蛋白质含量的测定65

Ⅰ．凯氏定氮法测定蛋白质含量65

Ⅱ．紫外吸收法测定蛋白质含量69

Ⅲ．双缩脲（Biuret）法测定蛋白质含量70

Ⅳ．Folin－酚法测定蛋白质含量72

Ⅴ．考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量74

实验八 醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质75

实验九 不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳分离预染的血清脂蛋白78

实验十 SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子质量81

实验十一 蛋白质相对分子质量的测定——凝胶层析法84

实验十二 植物组织中游离氨基酸组分的分离鉴定（薄层层析法）88

实验十三 蛋白质等电点的测定和两性解离90

实验十四 酶联免疫吸附测定法92

实验十五 影响酶作用的因素97

第九章　酶97

实验十六 过氧化氢酶活力的测定99

实验十七 淀粉酶活力的测定101

实验十八 蛋白酶活力的测定103

实验十九 血清碱性磷酸酶总活性的测定106

第十章　核酸109

实验二十 植物组织中DNA的提取和纯度鉴定109

实验二十一　DNA的琼脂糖凝胶电泳111

实验二十二 酵母RNA的提取——苯酚法113

实验二十三 酵母RNA的提取——浓盐法114

实验二十四 紫外吸收法测定核酸含量115

实验二十五 二苯胺法测定DNA含量117

实验二十六　定磷法测定RNA含量118

实验二十七 苔黑酚法测定RNA含量120

第十一章　维生素122

实验二十八 维生素C的定量测定122

实验二十九 维生素B1的定量测定124

第十二章　体内代谢127

实验三十 酶促转氨基作用及其鉴定127

实验三十一　胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响129

实验三十二 血清谷丙转氨酶（SGPT）活力测定（King氏法）130

实验三十三 肝组织的生酮作用133

实验三十四 糖酵解中间产物的鉴定134

实验三十五　SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳及蛋白印迹137

第三篇　生物化学综合实验137

实验三十六 猪血超氧化物歧化酶的分离纯化、活性测定及同工酶鉴定140

实验三十七　肝脏DNA的提取145

实验三十八　PCR基因扩增148

实验三十九　质粒DNA的提取及鉴定150

Ⅰ．质粒DNA的小批量提取150

Ⅱ．DNA的琼脂糖凝胶电泳153

Ⅲ．质粒DNA限制性酶消化155

附录158

附录一 常用缓冲溶液的配制方法158

附录二 硫酸铵饱和度的常用表164

主要参考文献166